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Enzymes酶

作者:超级管理员发布时间:2022-07-21 15:11:15

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BST DNA POLYMERASE, LARGE FRAGMENT

BST DNA聚合酶,大片段

Bst DNA Polymerase, Large Fragment is the portion of the Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase protein that contains the    polymerase activity, but lacks   exonuclease activity. Enzyme provide strong strand displacement activity. The optimum temperature is from 60-65°C. Bst becomes heat inactivated at 80°C. Bst Polymerase, Large Fragment is prepared from an E. coli strain containing a gene of the Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase gene, lacking the    exonuclease domain. Bst DNA聚合酶,大片段是嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶蛋白质中包含5´的部分→ 3´聚合酶活性,但缺乏5´→3´核酸外切酶活性。酶提供强大的链置换活性。最适温度为60-65°C。Bst在80°C下热失活。Bst聚合酶,从含有嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶基因的大肠杆菌菌株中制备大片段,缺少5´的→ 3´核酸外切酶结构域。

 

Storage condition: -20о C in 10 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25оС), 10 mM KCl, 1% BSA, 0,02% Tween 20, 50% glycerol. -在10 mM Tris-HCl(25ОС时pH值为8.0)、10 mM KCl、1%BSA、0.02%吐温20、50%甘油中加入20ОC。

 

Unit definition: One unit is defined at the amount of enzyme that will incorporate 10 nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 65°C. 一个单位定义为在65°C下30分钟内将10 nmol dNTP并入酸不溶性物质的酶量

 

Quality control: Each lot of enzyme is tested for endonuclease and non specific exonuclease activity. 每批酶都要进行核酸内切酶和非特异性核酸外切酶活性测试。

 

Applications:

 

• LAMP 灯具

 

• Reverse transcription 反转录

 

• Whole Genome Amplification 全基因组扩增

 

CAS9 NUCLEASE

The Cas9 protein is a recombinant endonuclease from Streptococcus pyogenes with a molecular weight of 150 kDa. Cas9 endonuclease in complex with RNA guides (crRNA duplex: tracrRNA) or single sgRNA catalyzes site-specific hydrolysis of the phosphodiester bond in double-stranded DNA. The cleavage is on the DNA chain between the third and fourth nucleotides from the 

PAM sequence (NGG is a motif adjacent to the protospacer) with the formation of blunt ends. Recombinant Cas9 endonuclease does not contain a nuclear localization sequence. 

Cas9蛋白是一种来自化脓链球菌的重组核酸内切酶,分子量为150 kDa。Cas9核酸内切酶与RNA导向物(crRNA双链:tracrRNA)或单链sgRNA复合物催化双链DNA中磷酸二酯键的位点特异性水解。切割发生在DNA链上,位于

 

PAM序列(NGG是与原间隔基相邻的基序)具有钝端的形成。重组Cas9核酸内切酶不含核定位序列。

 

Application: genomic editing, «CRISPR/Cas9» technology. 基因组编辑,«CRISPR/Cas9»技术。

 

Source: Cas9 endonuclease purified from E. coli strain containing a plasmid with the cloned full length gene of Cas9 Streptococcus pyogenes. 从含有克隆的化脓性链球菌Cas9全长基因质粒的大肠杆菌菌株中纯化的Cas9核酸内切酶。

 

Cas9 endonuclease concentration: 20 μM (20 pmol/μl). Cas9核酸内切酶浓度:20μM20 pmol/μl)。

 

Total amount of Cas9 endonuclease: 300 pmol (15 μl). Cas9核酸内切酶总量:300 pmol15μl)。

 

Storage buffer: 300 мМ NaCl, 50 мМ Tris-HCl, 0,1 мМ EDTA, 5 мМ β-mercaptoethanol, 50% glycerol (pH=7.5 @ 25°C). 

300ММNaCl,50ММTris HCl,0,1МEDTA,5ММβ-巯基乙醇,50%甘油(25°C时pH=7.5)。

 

The optimum reaction temperature: 37°C. 最佳反应温度:37℃。

 

Enzyme inactivation: 65°C for 5 minutes. 酶失活:65°C持续5分钟。

 


Quality control: Each batch of the enzyme is tested for enzyme activity, electrophoretic purity, and the absence of non-specific endonuclease activity. 每批酶都要进行酶活性、电泳纯度和非特异性核酸内切酶活性的检测。

 

Storage and transportation: at -20°С. 储存和运输温度为-20°С。




CAS9-NLS NUCLEASE

CAS9-NLS核酸酶

The Cas9-NLS protein is a recombinant endonuclease from Streptococcus pyogenes fused from the C-terminus to the repeated nuclear localization signal (NLS) of the SV40 virus (PKKKRKV). The molecular weight of the Cas9-NLS protein is163 kDa. Cas9-NLS endonuclease in complex with RNA guides (crRNA duplex: tracrRNA) or single sgRNA catalyzes site-specific hydrolysis of the phosphodiester bond in double-stranded DNA (Figure). The cleavage is on the DNA chain between the third and fourth nucleotides from the PAM sequence (NGG is a motif adjacent to the protospacer) with the formation of blunt ends. 

Cas9-NLS蛋白是一种由化脓链球菌产生的重组核酸内切酶,从SV40病毒(PKKKRKV)的C端融合到重复核定位信号(NLS)中。Cas9-NLS蛋白的分子量为163 kDa。Cas9 NLS核酸内切酶与RNA导向物(crRNA双链:tracrRNA)或单个sgRNA的复合物催化双链DNA中磷酸二酯键的位点特异性水解(图)。PAM序列的第三个和第四个核苷酸之间的DNA链(NGG是与原间隔基相邻的基序)发生断裂,形成钝端。

 

Application: genomic editing, «CRISPR/Cas9» technology. 基因组编辑,«CRISPR/Cas9»技术。

 

Source: Cas9 endonuclease purified from E. coli strain containing a plasmid with the cloned full length gene of Cas9 Streptococcus pyogenes. 从含有克隆的化脓性链球菌Cas9全长基因质粒的大肠杆菌菌株中纯化的Cas9核酸内切酶。

 

Cas9 endonuclease concentration: 20 μM (20 pmol/μl).

 Cas9核酸内切酶浓度:20μM20 pmol/μl)。

Total amount of Cas9 endonuclease: 300 pmol (15 μl). 

Cas9核酸内切酶总量:300 pmol15μl)。

 

Storage buffer: 300 мМ NaCl, 50 мМ Tris-HCl, 0,1 мМ EDTA, 5 мМ β-mercaptoethanol, 50% glycerol (pH=7.5 @ 25°C). 

300ММNaCl,50ММTris HCl,0,1МEDTA,5ММβ-巯基乙醇,50%甘油(25°C时pH=7.5)。

 

The optimum reaction temperature: 37°C. 最佳反应温度:37℃。

 

Enzyme inactivation: 65°C for 5 minutes. 酶失活:65°C持续5分钟。

 

Quality control: Each batch of the enzyme is tested for enzyme activity, electrophoretic purity, and the absence of non-specific endonuclease activity. 每批酶都要进行酶活性、电泳纯度和无非特异性核酸内切酶活性的测试。

 

Storage and transportation: at -20°С. 储存和运输温度为-20°С。